技術情報

日本薬局方におけるエンドトキシン試験法

第十八改正日本薬局方におけるエンドトキシン試験法：標準操作法

パイロテルを用いたゲル化法

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λ：0.03EU/mLのライセート試薬（パイロテル マルチテスト／シングルテスト）および試料溶液（10倍希釈液）を用いる標準操作法を示します。

必要な試薬および器具
試　薬
  • ライセート試薬：パイロテル マルチテスト／シングルテスト
  • 標準品：日本薬局方エンドトキシン標準品（以下、JP-RSE）
  • LAL試験用水（以下、LRW）
  • 緩衝液：グルカシールドまたはパイロソル
器　具
  • トキシペットサンプラー200、トキシペットサンプラー1000
  • 可変式連続分注器「MODEL8100」（株式会社ニチリョー）
  • トキシペットチップ200、トキシペットチップ1000
  • トキシペットディスペンサー用シリンジ（以下、シリンジ）
  • 乾熱滅菌試験管（アルミキャップ付、以下、試験管）
  • パイロチューブ アルミキャップ付（パイロテル マルチテスト用：10×75mm、以下、パイロチューブ）
  • 乾熱滅菌アルミキャップ（以下、アルミキャップ）
  • 乾熱滅菌アルミ箔（以下、アルミ箔）
  • 試験管ミキサー
ドライブロックバス
  • LAL試験用サーモアルミバスセット
標準操作法
1. 標準溶液および試料溶液等の調製
  •       1-1. エンドトキシン標準溶液の調製
    • （1）エンドトキシン標準原液（10,000EU/mL）を試験管ミキサーで1分間攪拌する。
    • （2）LRWを用いて10倍段階希釈を繰り返し、1.0EU/mLを調製する。
    • （3）さらに、下図のように2倍段階希釈を繰り返し、ライセート試薬の表示感度確認試験ならびにC液用のエンドトキシン標準溶液［0.06 （2λ）, 0.03（1λ）, 0.016（0.5λ）, 0.008EU/mL（0.25λ）］を調製する。
      ・段階希釈では各1分間試験管ミキサーで攪拌してください。

      エンドトキシン標準溶液の調製
      • 　　
  •       1-2. その他の試料溶液の調製
    • （1）A液の調製

      A液の調製

    • （2）B液の調製

      B液の調製

    • （3）D液の準備

      D液の準備

  •       1-3. ライセート試薬の準備
    • 予備試験 ライセート試薬の表示感度確認試験 16本
      反応干渉因子試験 30本
      限度試験法 8本
      定量試験法 20本
    • （1）下図に従い、必要本数分のライセート試薬を準備する。

      ライセート試薬の準備

  •       1-4. 試料溶液等の添加
    • （1）下図に従い、試料溶液等を添加する。

      試料溶液等の添加

  •       1-5. 加温
    • （1）アルミキャップで蓋をし、試験管ミキサーで1～2秒間攪拌する。
    • （2）ドライブロックバスで37（±1）℃、60（±2）分間静置する。
      ・加温中は振動を与えないように注意してください。


  •       1-6. 転倒
    • （1）ドライブロックバスより静かに取り出し、180°転倒する。

      転倒

  •       1-7. 判定（ゲル化法）


    • 判定（ゲル化法）